通过极简基因编码光催化邻近标记系统解码微蛋白相互作用组

微蛋白（通常小于100个氨基酸）调控多种细胞过程，但其体积小、丰度低，使得相互作用组图谱绘制颇具挑战，且对传统基于酶的邻近标记标签的扰动尤为敏感。在此，我们开发了FlashID，一种超紧凑的基因编码邻近标记（PL）系统，它将六氨基酸四半胱氨酸标签（CCXXCC，<700 Da）与开启型双砷荧光团光催化剂FlAsH相结合。在标签结合与可见光照射下，FlAsH产生单线态氧，从而实现对邻近蛋白的空间和时间可控的氧化标记。在对细菌微蛋白AzuC的平行分析中，FlashID回收到了已验证的相互作用蛋白GlpD，并鉴定出在测试条件下未被TurboID或IP-MS捕获的额外生理相关伴侣。FlashID还解析了多种微蛋白的区室特异性相互作用组，包括RP11-469A，我们将其鉴定为一种线粒体膜间隙蛋白，其与PHB2相互作用以调控增殖。最后，将FlashID扩展至大肠杆菌、哺乳动物细胞、秀丽隐杆线虫和拟南芥，确立了FlashID作为一种互补的、微扰最小的平台，用于在体内解码微蛋白相互作用网络并推进光催化邻近标记技术。

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