用于诱导型和剂量依赖性基因表达的 AAVS1 FRT 细胞系的构建与表征

以高可重复性研究生物学功能，需要能够提供精确且可诱导的转基因表达的稳定细胞系。然而，传统方法常常受限于随机基因组整合的局限，包括表达水平不可预测、基础活性泄漏以及内源位点被破坏。为应对这些挑战，我们利用CRISPR/Cas9(D10A)切口酶将TetOn3G-FRT盒整合到AAVS1安全港位点，从而构建了一种多功能的RPE1细胞系。该平台利用Flp-FRT重组系统实现转基因快速、位点特异性的“即插即用”插入，并结合Tet-On 3G系统实现严密、剂量依赖性的表达控制。所得的RPE1 AAVS1 FRT8细胞系能够在独立克隆间实现高度一致的转基因诱导，表现如同单克隆群体。我们通过多组学方法强调了严格细胞系表征的重要性。全基因组测序鉴定了靶位点的精确杂合整合以及其他染色体上的新发基因组重复。通过将WGS与高分辨率蛋白质组学和细胞周期分析相结合，我们确认这些改变并未显著扰动细胞稳态或表型适应性。这项工作为高效生成可诱导的AAVS1 FRT稳定细胞系建立了一个稳健可靠的平台，促进了现代分子生物学中的可重复研究。

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