猕猴中推定泛抑制性病毒载体的多模态表征

转基因方法和经过验证的病毒载体工具箱推进了我们对抑制性神经元如何塑造小鼠及其他啮齿类动物认知与运动控制的理解。然而，此类进展在非人灵长类（NHP）中一直难以实现。尽管许多研究展示了报告蛋白的表达，但很少有研究提供明确的定量证据，说明这些病毒构建体能否可靠地用于评估灵长类体内和体外功能，这反过来又阻碍了NHP研究者的广泛采用。在此，我们对推测的泛抑制性细胞靶向载体进行了表征，这些载体是利用Dlx5-6基因间区的区域构建的。泛抑制性病毒载体之所以有吸引力，是因为它们能够在同一动物中实现真实基准的光学标记和多种抑制性亚型的调控，并且当与机器学习方法结合时，能够为NHP实现细胞类型分类器。我们结合了在七只恒河猴中的体内麻醉电生理记录、体外脑片电生理和免疫组织化学，以评估三种构建体在多个感觉皮层和高级联合皮层中的特异性、完整性和有效性。这些载体可靠地将转基因表达限制在抑制性神经元中（81-97%）。然而，在局部GABA能神经元中，只有32-64%表达了转基因，具体取决于构建体。这种不完整性部分源于亚型间覆盖不均，其中小清蛋白阳性中间神经元中转基因表达强（约60-90%），钙结合蛋白阳性中间神经元中表达稀疏（约1-7%），而钙视网膜蛋白阳性中间神经元几乎完全被避开。将DLX2.0与ChrimsonR配对的构建体在体内光学标记方面表现优异，而h56D与bReaChES配对在体内最有效地抑制了神经活动。在脑片中，光激活表达转基因神经元的终末在耦合的锥体神经元中诱发了抑制性电流，证实了这些构建体的跨突触功能及其用于抑制性环路特异性突触评估和操控的用途。总体而言，这些结果为寻求在实验中部署GABA能细胞类型特异性工具的NHP研究者提供了严格的功能表征和定量指导。

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